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酶活性檢測的實(shí)驗原理介紹
點(diǎn)擊次數：683 更新時(shí)間：2022-12-21
為了檢測一種酶的催化活性，有必要首先鑒定從底物(S)到產(chǎn)物(P)轉化所包含的化學(xué)變化。迄今為止，在各種關(guān)于酶催化活性文章的相關(guān)論述中，最典型的分類(lèi)方式是按照其所催化的化學(xué)反應的類(lèi)型來(lái)進(jìn)行的(如氧化-還原、基團轉移、消除、異構化、重排、縮合、竣化作用等)（FreyandHegeman，2007)。此外，還應該考慮是否存在機制相似的化學(xué)過(guò)程:①涉及小分子底物或大分子蛋白質(zhì)或核酸;②在溶液中易于發(fā)生或需要膜結合組分才能進(jìn)行;③逆反應進(jìn)行到多大的程度。在任何情況下，酶的分析圍繞著(zhù)以可計量的方式將給定底物和相關(guān)產(chǎn)物的理化性質(zhì)進(jìn)行區分的能力來(lái)設計。在很大程度上，類(lèi)似的活性檢測方法已經(jīng)應用于這些亞群中的各種酶。在以某種已有檢測方法為基礎來(lái)為下面兩類(lèi)酶計檢測方法時(shí)要慎重，即不同物種來(lái)源的同源酶或催化相關(guān)化學(xué)反應的不同的酶。酶活性檢測的中心主題是確保初始速率的測定。為了重申這一要點(diǎn)，常見(jiàn)的和較好的做法是,在具有小于等于5%產(chǎn)物轉化的時(shí)間內測定反應物減少或產(chǎn)物生成的初始速率。這種做法可以給出在初始底物濃度條件下的接近起始反應速率的值。
酶的量或濃度可以用摩爾量表示，或者用酶單位的活性表示。
酶活力=每單位時(shí)間轉化的底物摩爾數=速率×反應體積。酶活性是存在的活性酶量的量度，取決于的條件。SI單位是katal，1 katal=1 mol/s，更實(shí)際的和常用的值是酶單位（U）=1μmol/min。1 U對應16.67 nanokatals。
酶的比活力是另一種常見(jiàn)的單位，代表酶的純度。用每毫克蛋白質(zhì)所含的酶活力單位數來(lái)表示。比活力=活力U/mg蛋白。
反應的速率是每單位時(shí)間的底物消失（或產(chǎn)物生成）的濃度。
如果已知100％純酶的比活性，那么不純的樣品將具有較低的比活性，從而可以計算純度。
